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抗壞血酸含量測定試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-273

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

提取液： 液體100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一： 液體15mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二： 液體8mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三： 液體15mL×1 瓶，4℃保存；

標準品： 粉劑10mg×1 瓶（避光） ，4℃保存（稱取1mg加入10mL提取液，即為100 μg/mL標準品）

試驗中所需的儀器和試劑：

研缽、冰、低溫離心機、可見分光光度計、1 μL玻璃比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

產(chǎn)品說明：

AsA 又稱維生素c 。AsA 是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底 物等。作為植物細胞中最重要的抗氧化劑，AsA 在保護葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用，也  是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標之一。

抗壞血酸具有較強還原能力將Fe3+還原成Fe2+，鄰二氮菲與Fe2+會形成紅色螯合物，在534nm處具 有強的吸收法，且吸光值與反應(yīng)液中抗壞血酸含量呈正比。

操作步驟：

一、樣品的前處理：

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織，加 入1mL提取液）進行冰浴勻漿。8000g ，4℃離心 20min ，取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（ 10⁴個） ：提取液體積（ μL）為500~ 1000：1 的比例（建議500 萬細胞加入1mL提取液） ，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w ，超聲3秒，間隔7秒，總時間  3min）；8000g ，4℃離心 20min ，取上清液置冰上混勻待測。

3、血清等液體：按照樣本體積（g）：提取液體積(mL)為 1：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1mL 樣本，加入1mL提取液） 進行混勻。8000g ，4℃離心 20min ，取上清置冰上待測。

二、測定操作表：

1、分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 534nm ，提取液調(diào)零。

2、測定前將所有試劑 37℃（哺乳動物） 或25℃ （其它物種） 水浴5min 以上。

3、標準曲線的繪制及樣本測定（按順序加入下列試劑）

充分混勻，室溫靜置 15min 后，534nm 處測定各管吸光值。如底部有沉淀，離心后再讀數(shù)

三、抗壞血酸含量計算

根據(jù)標準曲線，將樣品△A 帶入公式中（x ），計算出樣品濃度 y（μg/mL）。 

1、按蛋白濃度計算

抗壞血酸（μg / mg prot）=y×V  樣÷ （V  樣×Cpr）

2、按樣本鮮重計算

抗壞血酸（μg /g 鮮重） = y×V  樣÷(V  樣÷V  樣總×W)

3、按細胞數(shù)量計算

抗壞血酸（μg /10⁶ceLL）= y×V  樣÷(V  樣÷V  樣總×細胞數(shù)量)

4、按體積計算

抗壞血酸（μg /mL）=10y

V 樣總：上清液總體積，mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；細胞數(shù)量：以 106 為單位計量；T：樣本稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1、樣品處理需勻漿完全，抗壞血酸易分解，需避光保存

2、標準品：現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、若不確定樣品中抗壞血酸 含量的高低，可稀釋幾個梯度后再進行測量。

4、因為提取液中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。