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貨號(hào)：LE-1-231

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體9mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體50mL×1 瓶，4℃保存；

丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液，1mg/mL：液體1mL×1瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

丙酮酸通過乙酰CoA 連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在堿性溶液中呈櫻紅色。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、丙酮酸提?。?/span>

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）： 提取液體積（ mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL  提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W ，超聲3s ，間隔10s ，重復(fù)30 次），靜置30min ，8000g ，常溫離心 10min ，取上清待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液） ，進(jìn)行冰浴勻漿，靜置30min ，8000g ，常溫離心10min ，取上清待測。

3、血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，靜置30min ，8000g ，常溫離心10min ，取上清待測。

4、標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至100 、50 、25 、12.5 、6.25 、3.125 、1.5625 、0 g/ml。

二、測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至520nm ，蒸餾水調(diào)零。

2、取300μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本+100μL試劑一于1.5mLEP管中，混勻，靜置2min ，加入500μL試劑二， 混勻，于520nm 波長處測定吸光值A。

三、丙酮酸含量計(jì)算：

1、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和測定值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線； y為丙酮酸鈉含量（ μg/mL），x為吸光值。

2、按照血清（漿）體積計(jì)算

丙酮酸含量（ μg/mL）= (y×V1)÷ （V3×V1÷V2）=y×10

3、按照蛋白濃度計(jì)算

丙酮酸含量（ μg/mg prot）=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

丙酮酸含量（ μg/g 鮮重） = (y×V1)÷(W ×V1÷V2）=y÷W

5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

丙酮酸含量（ μg/10⁴ cell）＝(y×V1)÷（500×V1÷V2）= y÷500

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.3mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500