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甘油三酯（TG）含量測(cè)定試劑盒說明書(分光光度法)

貨號(hào)：LE-1-145

正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

TG 是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細(xì)胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。

測(cè)定原理：

用異丙醇提取 TG ，脂蛋白酯酶水解 TG 生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油與三磷酸腺苷在甘 油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成 H2O2 ，過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-氨基安替比林 偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在 505 nm 處有特征吸收峰。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配置：

試劑一：液體 60 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 26 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 26 mL×1 瓶，4℃避光保存。

TG 的提?。?/span>

1、組織中 TG 的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取 約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g ，4℃離心 10min，取上清，即 TG 待測(cè)液。

2、細(xì)胞、細(xì)菌中 TG 的提?。?/span>先收集 400-500 萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清， 加 1mL 試劑一，超聲波破碎 1min（強(qiáng)度 20％，超聲 2s，停 1s），8000g ，4℃離心 10min， 取上清，即 TG 待測(cè)液。

3、血清（漿）樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定操作：

可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 505 nm。

混勻，室溫下靜置 20min，于 505 nm 波長(zhǎng)處讀取吸光值，記為 A 空白和 A 測(cè)定，△A=A 測(cè) 定-A 空白。空白管只需測(cè)一管。

計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.6522x - 0.0199； R² = 0.9979；x：標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL） y：吸光值差值 ΔA。 

1、血清（漿） 中甘油三酯含量計(jì)算：

TG 含量（mg/mL）= (ΔA+0.0199）÷0.6522=1.533×(ΔA+0.0199）

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中甘油三酯含量計(jì)算：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

TG 含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.6522×V 樣÷(Cpr×V 樣）

=1.533×(ΔA+0.0199）÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

TG 含量（mg/ g  鮮重）=(ΔA+0.0199）÷0.6522×V 樣÷(W×V 樣÷V 樣總）

=1.533×(ΔA+0.0199）÷W

V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入試劑一體積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。

注意事項(xiàng)：

1、試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應(yīng)該及時(shí)蓋 緊。

2、最低檢出限為 100μg/mL。