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清鐵濃度檢測(cè)試劑盒說明書(分光光度法) 

貨號(hào)：LE-1-251

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

血清鐵是指血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白所結(jié)合的鐵，該指標(biāo)常用于鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血。

測(cè)定原理：

亞硫酸鈉還原血清 Fe³⁺生成成 Fe²⁺，Fe²⁺進(jìn)一步與 2, 2’- 聯(lián)吡啶顯色，在 520nm 處有吸收峰，測(cè)定該 波長(zhǎng)光吸收值即可計(jì)算血清鐵含量。

試劑組成和配置：

試劑一：粉劑×1 瓶 ，4℃保存 。 臨用前配制，加入 20 ml 蒸餾水充分溶解。

試劑二：粉劑×1 瓶 ，4℃保存 。 臨用前配制，加入 625μl 冰醋酸，加入 20 ml 蒸餾水充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體 1ml×1 支（EP 管） ， 10 μmol/L Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì) 、離心機(jī) 、可調(diào)式移液槍 、 1ml 玻璃比色皿 、冰醋酸 、氯仿和蒸餾水。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 520 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)液解凍：提前取出標(biāo)準(zhǔn)液，置于室溫下充分解凍后混勻。

3、空白管：取 EP 管，依次加入 400 μl 蒸餾水，400 μl 試劑一 ，400 μl 試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴  5min， 自來水冷卻 。加入 200 μl 氯仿（自備），充分震蕩混勻；室溫 10000rpm，離心 10min，小心吸取上 層液 700 μl，加入 1ml 玻璃比色皿，于 520 nm 測(cè)定吸光度，記為 A 空白管。

4、標(biāo)準(zhǔn)管：取 EP 管，依次加入 400 μl 標(biāo)準(zhǔn)液，400 μl 試劑一 ，400 μl 試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴  5min， 自來水冷卻 。加入 200 μl 氯仿，充分震蕩混勻；室溫 10000rpm，離心 10min，小心吸取上層液 700 μl，加入 1ml 玻璃比色皿，于 520 nm 測(cè)定吸光度，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

5、測(cè)定管：取 EP 管，依次加入 400 μl 血清，400 μl 試劑一，400 μl 試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴 5min， 自來水冷卻 。加入 200 μl 氯仿，充分震蕩混勻；室溫 10000rpm，離心 10min，小心吸取上層液 700 μl，加  入 1ml 玻璃比色皿，于 520 nm 測(cè)定吸光度，記為 A 測(cè)定管。

注意 ：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

血清鐵濃度計(jì)算公式：

血清鐵含量(μmol /dL)=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總 

= (A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)液： 10 μmol/L Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液；V 總：標(biāo)準(zhǔn)液總體積 1ml； 1 dL=0.1 L。

注意事項(xiàng)：

1、血清鐵含量少，所用器皿（EP 管）需要注意，避免被鐵污染。

2、試劑一和試劑二溶液不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用，新配制的試劑當(dāng)天使用完畢。

3、最低檢出限為 1μmol/L。