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貨號(hào)：LE-1-384

正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無(wú)脊椎動(dòng)物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂， 從而引發(fā)多種病癥。

測(cè)定原理：

MAO催化產(chǎn)生H2O2，過(guò)氧化物酶在有氧存在時(shí)催化H2O2分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與單胺氧化酶活性成線性關(guān)系。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液一：液體 100mL×1  瓶，4℃保存。

提取液二：液體 100mL×1  瓶，4℃保存。

試劑一：液體 20mL×1  瓶，4℃保存；

試劑二：液體 4mL×1  瓶，4℃保存；

試劑三：液體 1mL×1  支，4℃保存；

粗酶液提取：

1.  稱取約0.1g樣品，加1mL預(yù)冷的提取液一充分冰浴勻漿，1000g，4℃，離心10min，棄沉淀； 把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1mL生理鹽水或PBS，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測(cè)定）。

2.  細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g， 4℃，離心30min，棄上清；加入1.0mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min， 棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL生理鹽水或PBS，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測(cè)定），取上清置于冰上待測(cè)。

3.  血清：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、MAO 檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混勻，待用；用不完的試劑4℃可保存一周；

3、測(cè)定前將MAO檢測(cè)工作液在37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴10min以上。

4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和240μL工作液，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄500nm下20s吸光值A(chǔ)1和1min20s后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。

MAO 活力單位的計(jì)算

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）MAO 活力的計(jì)算

單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

MAO（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=3333×ΔA 

2、動(dòng)物組織 MAO 活力的計(jì)算

（1）按蛋白濃度計(jì)算

單位定義 ：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

MAO（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

MAO（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

=3333×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.5×10^-4 L；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù)，7.5×10³ L/mol/cm； d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T： 反應(yīng)時(shí)間，1min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

1、血清（漿）MAO 活力的計(jì)算

單位定義 ：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

MAO（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=6666×ΔA 

2、動(dòng)物組織 MAO 活力的計(jì)算

（1）按蛋白濃度計(jì)算

單位定義 ：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

MAO（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr)÷T=6666×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

MAO（nmol/min/ g  鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=6666×ΔA÷W