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植酸酶（phytase）試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-382

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯水解酶，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉化為可供有機體利用的有效磷，降低糞便中的磷含量，減輕對環(huán)境的污染，改善營養(yǎng)成分的吸收和利用，因此具有極其廣泛的研究和應用價值。

測定原理

植酸酶在一定溫度和 pH 值條件下，水解底物植酸鈉生成無機磷與肌醇衍生物，無機磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應生成藍色復合物，在 700nm 處有特征吸收峰，根據(jù) 700nm 處吸光值變化可計算得植酸酶活性。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，超聲溶解器，回旋式振蕩器。

試劑組成和配制

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

緩沖液：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存，臨用前加緩沖液 10mL 配制，現(xiàn)用現(xiàn)配；用不完的試劑 4℃ 保存一個月。

試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

顯色劑：粉劑×6 瓶，4℃保存，臨用前根據(jù)用量每瓶加 1mL 雙蒸水溶解，再加 4mL 試劑二混勻。

樣本處理

1、酶制劑：按照質量（g）：提取液體積(mL)為 1：500~1000 的比例（建議稱取約 0.001g，加入 1mL 提取液）加入提取液，在超聲波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振蕩器振蕩15min，待測。

2、組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL提取液）進行冰浴勻漿，在超聲波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振蕩器振蕩 15min， 4℃，4000g 離心 10min，取上清待測。

3、飼料樣品：飼料烘干粉碎，過 40 目篩，按照質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，在超聲波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振蕩器振蕩 15min，4℃，4000g 離心 10min，取上清待測。

4、培養(yǎng)液等液體樣品：混勻直接測定。

測定操作表

酶活性計算公式

標準曲線：y = 0.2764x + 0.0082，R² = 0.9998；x 為標準品濃度（μmol/mL），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每毫克蛋白每分鐘從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△ A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T

=0.1206×（△ A-0.0082）÷Cpr

2、按照樣本質量計算

酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每克樣本每分鐘從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min /g 鮮重）=（△ A-0.0082）÷0.2764÷W÷T

=0.1206×（△ A-0.0082）÷W

3、培養(yǎng)液等液體樣品

酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每毫升液體每分鐘從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min /mL）=（△ A-0.0082）÷0.2764÷T

=0.1206×（△ A-0.0082）

Cpr：樣本蛋白含量，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，30min。

注意事項

1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制，每一瓶是 10 個樣本的用量，新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過期，應放棄使用。

2、ΔA 線性范圍為 0.01-2。