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甜菜堿含量檢測試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-378

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內的季銨型水溶性生物堿，是生物體內膽堿的氧 化產物，可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進動物蛋 白質和脂肪代謝、增進食欲、緩和應激、調節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、 醫(yī)藥、食品添加劑等領域有較廣泛的應用。

測定原理

甜菜堿在強酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應產生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在 525nm 處有特征吸收峰，測定 525nm 處的吸光值，可計算得樣品的甜菜堿含量。

自備實驗用品及儀器

天平、離心機、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、乙醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 30mL×1 瓶 ，4℃保存；

試劑一：粉劑 3 瓶，4℃保存，臨用前根據用量配制，每瓶加 40mL 蒸餾水溶解，加 780μL 濃鹽酸調 pH 為 1。

試劑二：99%乙醚，自備。取無水乙醚 99mL，加入蒸餾水 1mL，混勻。

試劑三：70%丙酮， 自備。（易揮發(fā)，根據用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）。

甜菜堿提取

取烘干后過 40  目篩的樣品約 0.04g，加 1.6mL 水，置于 60℃提取 30min，期間不斷震蕩。 再加入 400μL 提取液，混勻后 10000g ，25℃,離心 10min，取上清液。

測定操作表

1、分光光度計預熱 30min，調節(jié)波長至 525nm。

2、操作表

甜菜堿含量計算公式

標準條件下測定的回歸方程為 y = 1.004x + 0.0057，R² = 0.9993；x 為甜菜堿濃度（mg/mL）， y 為吸光值。

甜菜堿含量（mg/g 干重）= (ΔA-0.0057）÷ 1.004× V 標準÷(V 樣÷V 樣總×W) 

= 1.99×(ΔA-0.0057）÷W

V 標準：標準品體積，1.2mL；V 樣：反應中樣本體積，1.2mL；V 樣總：加入提取液體積，2mL；W：樣本質量，g

注意事項

1、試劑一配制時 pH 嚴格控制為 1，否則會導致反應不完全，配制后 4℃只能穩(wěn)定幾個小時，配制后盡快使用。

2、試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護工作。