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總抗氧化能力檢測(cè)試劑盒說明書(分光光度法)

貨號(hào)：LE-1-161

正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

研究意義：

測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中 常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。 

測(cè)定原理：

在酸性環(huán)境下，抗氧化物質(zhì)還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的 Fe2+-TPTZ 的能 力反映了總抗氧化能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品：

恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 60mL×1 瓶，使用前預(yù)冷。 

試劑一：液體 50 mL×1 瓶，避光保存。

試劑二：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 5 mL×1 瓶，避光保存。

混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合，使用前 37℃預(yù)溫。

樣品的制備：

1、血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品

血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA  抗凝）4℃ , 5000rpm  離心 10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以-80℃凍存（不宜超過 30 d）后再測(cè)定。

2、組織樣品

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g ，4℃離心 10min ，取上清，置冰上待測(cè)。

3、細(xì)胞樣品

按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000 ：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

操作步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 593nm。

2、操作表

注意：空白管只需測(cè)定一次，若測(cè)定管吸光值大于 2 則需要用提取液稀釋。

總抗氧化能力計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.4832x + 0.0134      R²  = 0.9996            x:Trolox 濃度(μmol/mL)

y:吸光值差值△A

單位定義:用從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量來表示樣本的總抗氧化能力。

1、按樣本質(zhì)量計(jì)算

總抗氧化能力(μmol Trolox/g  鮮重）=(△A-0.0134）÷2.4832×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W) 

=0.4027×(△A-0.0134）÷W

2、按樣本蛋白濃度計(jì)算

總抗氧化能力(μmol Trolox/mg prot）=(△A-0.0134）÷2.4832×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×Cpr) 

=0.4027×(△A-0.0134）÷Cpr

3、按細(xì)胞計(jì)算

總抗氧化能力(μmol Trolox/10⁴ cell）=(△A-0.0134）÷2.4832×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù) 量（萬個(gè)））

= 0.4027×(△A-0.0134）÷  細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）

4、按液體體積計(jì)算

總抗氧化能力(μmol Trolox/mL）= (△A-0.0134）÷2.4832 

=0.4027× (△A-0.0134）

V 樣總：加入提取液體積，1 mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，50μL；W：樣品質(zhì)量，g； Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

注意事項(xiàng)：

1、試劑二對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴乳膠手套操作。

2、盡量避免使用在酸性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑，否則對(duì)本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

3、樣品中不宜添加 Tween 、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑。