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蔗糖合成酶（合成方向；SS-Ⅱ) 試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-287

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫”器官運輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC  2.4.1.13）是雙向反應酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關鍵酶之一。 研究其合成方向 SS-Ⅱ的活性對于植物蔗糖合成具有重要意義。

測定原理

SS-Ⅱ催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應生成蔗糖，蔗糖與間苯二酚反應可呈現(xiàn)顏色變 化，在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、移液器、 1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 4mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 3mL×1 瓶，4℃保存 ；

試劑四：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；

試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；

樣品測定的準備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1： 5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

混勻，25℃準確水浴 10min

沸水浴中煮沸 10min 左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻

混勻，沸水浴 30min，冷卻后， 480nm 下測定各管吸光值。標準管和空白管只要做一管。每個測定管需要設一個對照管。

SS-Ⅱ活性計算

1、按照蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg  蔗糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C 標準管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白 管)÷(V1×Cpr)÷T

=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷Cpr

2、按照樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg  蔗糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg/min /g 鮮重) = C 標準管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白 管)÷(W×V1÷V2)÷T

=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷W

C 標準管：標準管濃度， 1000μg/mL；V1 ：加入反應體系中樣本體積，0.03mL； V2：加入 提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T ：反應時間：10min。