自拍偷自拍亚洲精品第|精品无码一级黄色视频|国产亚洲一区二区不卡片|色综合天天综合网国产人|天码精品专区一区二区三区|日韩免费无码专区精品观看|国产女主播精品大秀系列在线|国产欧美一区二区三区另类精品

谷氨酰胺合成酶（GS）試劑盒說(shuō)明書(shū)(分光光度法)

貨號(hào)：LE-1-194

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷 氨酰胺，不僅可以防止過(guò)多的銨離子對(duì)生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)存和運(yùn)輸形式。

測(cè)定原理：

GS 在 ATP 和 Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨?；?/span> 異羥肟酸，在酸性條件下形成的絡(luò)合物在 540nm 處有最大吸收峰，可用分光光度計(jì)測(cè)定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：30mL ×1 瓶，4℃保存。

試劑一：12mL ×1 瓶，-20℃保存。臨用前 37℃預(yù)熱 20min，充分混勻，如有沉淀，靜置 10min，取上清待用。 

試劑二：12mL ×1 瓶，-20℃保存。臨用前 37℃預(yù)熱 20min，充分混勻，如有沉淀，靜置 10min，取上清待用。 

試劑三：粉劑 ×2 瓶，-20℃保存。用時(shí)每瓶加入 5ml 蒸餾水充分溶解待用。

試劑四：15mL ×1 瓶，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì) 、水浴鍋 、 臺(tái)式離心機(jī) 、可調(diào)式移液器 、 1 ml 玻璃比色皿 、研缽 、冰和蒸餾水。

樣本測(cè)定的準(zhǔn)備：

1、細(xì)菌 、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（ 104 個(gè)）：

提取液體積（ml）為 500~ 1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或 細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰 上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（ g） ：提取液體積(ml)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱(chēng)取約 0. 1g 組織，加入 1ml 提 取液） ，進(jìn)行冰浴勻漿 。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在 EP 管中加入下列試劑：

混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴 30min

混勻，25℃室溫靜置 10min 后，5000g，25℃離心 10min，取上清液測(cè)定 540nm 處的吸光值 A。△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管 。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

GS 活力單位的計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 0.8348x + 0.0008，R² = 0.9999

1、血清（漿）GS 活性

單位定義：每 ml 血清（漿）在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生 1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。

GS ( μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反總÷V 樣÷T

= 10.268×ΔA

2 、組織 、細(xì)菌或細(xì)胞 GS 活性

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生 1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。

GS ( μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T

= 10.268×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生 1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。

GS ( μmol/h/g 鮮重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T

= 10.268×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生 1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。

GS ( μmol/h/10⁴ cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T 

=0.021×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.75ml； V 樣：加入樣本體積，0. 175ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml； T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。