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總膽固醇含量測定試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-146

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

TC 包括游離膽固醇和膽固醇酯 。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。

測定原理：

利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為 FC； 進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-膽甾烯酮和 H2O2 ；最后利用過氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類化合物；在 500nm 有特征吸收峰，其顏色深淺與 TC 含量成正比。

試劑盒的組成：

試劑一：異丙醇（自備）50ml×1 瓶

試劑二：液體 50ml×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 100μl×1 瓶，4℃保存。

TC 標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1ml×1 支 ，0.5μmol/ml，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì) 、水浴鍋 、可調(diào)式移液槍 、 1ml 玻璃比色皿 、異丙醇和蒸餾水。

TC 的提?。?/span>

1 、組織中 TC 的提?。?/span>按照組織質(zhì)量（g） ：試劑一體積(ml)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織， 加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心 10min，取上清，即 TC 待測液。

2 、細(xì)胞 、細(xì)菌中 TC 的提?。?/span>先收集400-500 萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加 1ml 試劑一 ，超聲波 破碎 1min（強(qiáng)度 20％ ，超聲 2s，停 1s） ，即 TC 待測液。

3 、血清（漿）等樣品：直接測定。

測定操作：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 500 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、TC 工作液的配制：臨用前，吸取約 0.8ml 試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，TC 工作液置于 37℃水浴 10min 。用不完的工作液 4℃保存一周。

3、標(biāo)準(zhǔn)管：依次在 1ml 玻璃比色皿中加入 100μl TC 標(biāo)準(zhǔn)液和 900μl TC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于 500nm 測定 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4、測定管：依次在 1ml 玻璃比色皿中加入 100μl TC 待測液和 900μl TC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于 500nm 測定 A 測定管。

5、空白管：依次在 1ml 玻璃比色皿中加入 100μl  試劑一和 900μl TC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于 500nm 測定 A 測定管。

注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測定一次。

TC 含量 計(jì)算公式：

1、血清（漿） 中 TC 含量：

TC ( μ mol /dL）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×100 

= 50×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml； 100 ml： 1dL= 100 ml。

2、組織中 TC 含量：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

TC ( μ mol/mg prot）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr 

= 0.5×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

TC ( μ mol / g 鮮重）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W 

= 0.5×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml；樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g/ml

3、細(xì)胞 、細(xì)菌中 TC 含量：

TC ( μ mol /10⁴ cell）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（10⁴ cell /L） 

= 0.5×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（10⁴ cell /L）

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml。

試劑盒最低檢出限為 1nmol/ml。