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測(cè)定意義：

花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類化合物?；ㄉ諒V泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實(shí)中，使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色，是植物主要的呈色物質(zhì)。 

類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶（UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT）是花色苷合成過(guò)程的最后一個(gè)酶，可以把不穩(wěn)定的花色素催化成花色苷，在一定范圍內(nèi)，UFGT活性與花色素苷的合成呈現(xiàn)正相關(guān)。

測(cè)定原理：

UFGT 催化UDPG 與槲皮素生成 UDP；UDP 在丙酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下，氧化 NADH為 NAD+，NAD+生成速度與 UDP 含量成正比，通過(guò) 340nm 吸光度下降速度反映 UFGT 活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存；臨用前加入 10mL 試劑四溶解。

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

試劑三：液體 100μL×1 管，4℃避光保存； 試劑四：液體 70mL×1 瓶，4℃保存；

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL

提取液），冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

1、在EP 管中加入如下試劑

混勻，30℃反應(yīng) 4h，95℃水浴 5min 滅活，冷卻至室溫。10000g 4℃離心 5min，取反應(yīng)液待測(cè)。

2、工作液配制：在試劑二中加入 50mL 試劑四溶解，再加入 50μL 試劑三，混勻待用。用不完的工作液分裝后-20℃保存一個(gè)月，禁止反復(fù)凍融。

3、在 1mL 石英比色皿中加入如下試劑

UFGT 活力計(jì)算：

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化 1nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

UFGT 活力(nmol/min/mg prot)=ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹÷（V 樣×Cpr）÷T×2

=67×ΔA ÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化 1nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

UFGT 活力(nmol/min/g  鮮重)=ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T×2

=67×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，240 min；2，稀釋倍數(shù)；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；