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支鏈淀粉含量試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-083

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

支鏈淀粉是具有高度分支的多糖，淀粉中直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例和含量對淀粉產(chǎn)品的加工、物化特性、糊化溫度等有著直接的影響，對于不同比例直、支鏈淀粉的淀粉的研究具有重要的意義。

測定原理：

利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，利用雙波長比色法測定支鏈淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 50mL×1 瓶；4℃保存；

試劑二：乙醚 50mL×1 瓶；4℃保存；(自備)

試劑三：液體 50mL×1 瓶；4℃保存；

試劑四：液體 4mL×1 瓶；4℃保存；

試劑五：液體 1mL×1 瓶；4℃保存；

淀粉提?。?/span>

稱取 0.01~0.02g 烘干樣本（建議稱取約 0.01g）于研缽中研碎，加入 1mL 試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入1mL 試劑二（乙醚）振蕩 5min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入 1mL 試劑三充分溶解，90℃水浴 10min，冷卻后待測。

測定步驟：

分光光度計預(yù)熱 30min 以上，蒸餾水調(diào)零。

測定管：在 EP 管中依次加入 100uL 樣本， 70uL 試劑四，600uL 蒸餾水，10uL 試劑五，220uL 蒸餾水，混勻，分別測定 550 和 743nm 處吸光值，ΔA 測定=A550-A743。

空白管：在 EP 管中依次加入 100uL 試劑三，70uL 試劑四，600uL 蒸餾水，10uL 試劑五，220uL 蒸餾水，混勻，分別測定 550 和 743nm 處吸光值，ΔA 空白=A550-A743。

支鏈淀粉含量計算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y=0.1214x+0.0076；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

支鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076)×V1]÷0.1214÷(V1×Cpr)

=8.24×(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

支鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2)

=8.24×(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

最低檢測限為 10mg/g 干重或 0.1mg/mgprot。