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土壤脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒說明書（微量法）

測(cè)定意義：

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對(duì)有機(jī)物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。

測(cè)定原理：

氫受體 2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在細(xì)胞呼吸過程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF 呈現(xiàn)紅色，在波長(zhǎng)485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測(cè)定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品：

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸餾水、丙酮（不允許快遞，請(qǐng)用戶自備）。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1 瓶，使用前加 5mL 水溶解，4℃避光保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）。

試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：丙酮，自備。

樣品處理：

1. 土壤樣品： 準(zhǔn)確稱取過40目篩的新鮮土壤樣品約0.1g（以保證TTC與土壤顆粒充分接觸）。

2. 污泥樣品：污泥用蒸餾水洗滌，10000g，25℃，離心10min，棄上清，反復(fù)3-4次。

測(cè)定步驟和操作表：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 0min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至485nm。

2、操作表

脫氫酶活力計(jì)算：

酶活單位定義：

在 37℃時(shí)，每克樣品每小時(shí)使反應(yīng)體系 OD 值每增加0.01為一個(gè)酶活單位。

計(jì)算公式：脫氫酶活性（U/g）=A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T：培養(yǎng)時(shí)間，h；W：樣品質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃，最好在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。

2. 試劑三易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，戴口罩，戴乳膠手套操作。

3. 反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng)，并去除干凈殘留的反應(yīng)液。

4. 如果測(cè)定出來的吸光值較大，減少樣品用量再進(jìn)行測(cè)定。

5. 試劑盒 2-8℃保存。