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乙醇含量測試盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-332

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

酒是含酒精（乙醇）飲料的統(tǒng)稱，乙醇是酒的主要成分，是衡量酒質(zhì)量的重要指標之一。我國是世界上最早發(fā)明釀酒的國家，也是酒類產(chǎn)品消費大國，其消費量居世界之首。因此，快速、準確測定酒中乙醇含量，對于確保酒的質(zhì)量和保護消費者的健康具有重大意義。

測定原理：

乙醇在乙醇脫氫酶的催化下氧化脫氫生成乙醛，同時，NAD 被還原生成 NADH，NADH 在1-mPMS 的作用下使 WST-8 顯橙黃色，通過 450 nm 下測定吸光值變化可測得乙醇含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 30 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 15 mL 試劑三充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

試劑三：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：液體 3mL×1 管，4℃避光保存。

乙醇提?。?/span>

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 蒸餾水），進行勻漿，8000g，25℃離心 10min，取上清待測。

2、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：蒸餾水體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 蒸餾水），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）， 8000g， 25℃離心 10min，取上清待測。

3、血清（漿）等液體樣品：直接測定。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 450nm。

2、工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液

3、樣本測定

按下表加入如下試劑

混勻后記錄 450nm 下測定初始吸光值 A1，和 37℃避光孵育 10min 后的吸光值 A2，計算△A=A2-A1。

乙醇含量計算：

標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0512x + 0.0055 R² = 0.9991； x 為乙醇含量（μmol/mL），y 為吸光值差值△A。

1、按照血清（漿）體積計算

乙醇含量（μmol/mL）= (△A-0.0055)÷0.0512

=19.5×(△A-0.0055)

2、按照樣品質(zhì)量計算

乙醇含量（μmol/g 鮮重）= [ (△A-0.0055)÷0.0512×V1]÷(W ×V1÷V2）

= 19.5×(△A-0.0055)÷W

3、按照細菌或細胞密度計算

乙醇含量（μmol/10⁴ cell）= [ (△A-0.0055)÷0.0512×V1]÷（500×V1÷V2）

=0.039×(△A-0.0055)

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.2mL；V2：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬；