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貨號(hào)：LE-1-177

正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。

測(cè)定原理

AP-TEMED 系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成  NO₂^-， NO₂^- 與對(duì)氨基苯磺酸和 α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在 530nm 處有特征吸收峰，樣品對(duì)超氧陰離子的清除 能力與 530nm 的吸光值呈負(fù)相關(guān)。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 3mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1瓶， 4℃避光保存。臨用前加 12mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品處理

1、組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃, 10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000 ：1  的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒， 總時(shí)間 3min）；然后 4℃, 10000g 離心 10min ，取上清置于冰上待測(cè)。

3、培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。

4、粉劑藥物可配制成相同濃度，比如 1mg/mL。

測(cè)定操作

注意：對(duì)照管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式

超氧陰離子清除率 I%=（A對(duì)照管-A測(cè)定管）÷A對(duì)照管×100%

注意事項(xiàng)

1、試劑一 4℃可保存 2 個(gè)月，配制好的試劑二 4℃可保存一周，建議實(shí)驗(yàn)前配制，并盡快使用。

2、樣品處理完后立即進(jìn)行測(cè)定，或者低溫保存不超過(guò) 24 小時(shí)。