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蔗糖酶試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-285

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的關(guān)鍵酶之一，能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖 而被機(jī)體吸收。

測定原理：

本試劑盒采用 3.5－二硝基水楊酸法測定蔗糖酶催化產(chǎn)生的還原糖的含量，由此可得出蔗糖  酶水解速度。其原理是 3.5－二硝基水楊酸與還原糖共熱被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比。此法操作簡便、迅速、雜質(zhì)干擾較小。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、沸水浴、可調(diào)式移液器、 1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一： 液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1支  ，4℃保存，用時加入 1.5mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 5mL×1 瓶，常溫保存；

樣品測定的準(zhǔn)備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1： 5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

加樣表和測定步驟：

置于 25℃準(zhǔn)確水浴 10min

混勻， 95℃水浴 5min 左右（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫

混勻，520nm 蒸餾水調(diào)零，測定各管吸光值 ，ΔA=A 測定-A 對照，每個測定管設(shè)一個對 照管。

蔗糖酶活力計算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 0.1296x -0.12；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、按照蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化水解 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T

=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。

3、按樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化水解 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

蔗糖酶活力(μg/min/g  鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T

=771×(ΔA  +0.12) ÷W。

1000 ：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積， 1mL；T：反應(yīng)時間， 10min；  Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。