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小鼠摘除眼球采血及分離血清

一.器材

離心管,彎頭鑷子,離心機,移液器

二.步驟

1. 摘除眼球采血

1)左手拇、食指抓取小鼠雙耳及頸后皮膚,小指固定尾部;

2)中指將小鼠左側(cè)前肢輕壓在胸骨心臟部位,無名指按在腹部,捻動拇指,輕壓取血側(cè)眼部皮膚,使眼球充血突出;

3)用彎頭鑷夾取眼球;

4)根據(jù)需要捻動拇指與食指的方向,使血液從眼眶內(nèi)以不同速度垂直流入離心管;

5)同時用左手中指輕按小鼠心臟部位,以加快心臟泵血速度;

6)當血液流盡時,用脫臼法處死小鼠。

2. 分離血清

1)將離心管中的血置37℃溫箱或水浴1小時,也可室溫2小時;

2)再置4℃冰箱內(nèi)3~4小時或過夜;

3)待血液凝固血塊收縮后,4000rpm離心10分鐘;

4)取上清于干凈的離心管中,保存于-20℃,或加入防腐劑(0.01%硫柳汞或0.02%疊氮鈉),置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/span>

三.注意:

1. 采血前,可給小鼠喂點水;

2. 摘眼球采血取血量能達0.8~1.2ml,但老年和疾病小鼠血量會降低;

3. 采血場所有充足的光線;室溫夏季保持在25~28℃,冬季,15~20℃為宜;

4. 防止血液浸入眼部周圍毛發(fā),否則會造成污染和溶血;

5. 按壓心臟時,用力一定要適度,若用力過度,一是會造成動物采血中途死亡,使采血不完全,二是有可能引起溶血現(xiàn)象發(fā)生,影響實驗結(jié)果;

6. 采血用的器材和試管必須保持清潔干燥;

7. 采血時要防止小鼠掙扎,否則會損失比較多的血樣;

8. 血液凝固后不宜在4℃放置過久,否則會溶血。

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